Методика забарвлення за Грамом: підготовка, проведення, оцінка результату

Методика забарвлення по Граму – експрес-метод, що дозволяє визначити вид бактерій. Технологія виявлення патогенів розроблена бактеріологом Гансом Грамом. Він був незвичайною людиною, скромним. У своїй роботі він сказав: «Я публікую методику забарвлення, свідомо знаючи, що вона має деякі недоліки, але я не втрачаю надії, що мій метод буде доопрацьований і стане корисним». Так і сталося. Його технологія стала однією з провідних при визначенні типу бактерій. Методика забарвлення за Грамом заснована на будову прокаріотів, з-за чого бактерії набувають той чи інший відтінок.

Рекомендації

Перш ніж приступити до фарбування, необхідно підготувати робоче місце і зразок. Від якості останнього залежить, наскільки хорошим буде результат. Наприклад, для аналізу беруть мокротиння глибокого кашлю, а не просто слину.

При роботі зі зразками обов’язково дотримуються правила безпеки. Під час роботи на руках повинні бути рукавички. Також варто бути уважним при роботі зі спиртом, ацетоном. Ці речовини вогненебезпечні і легко спалахують при нагріванні.

При роботі з предметними скельцями їх акуратно беруть пінцетом або двома пальцями за бічні краї так, щоб не чіпати мазок.

Загрузка...

Підготовка до роботи

Починається методика забарвлення за Грамом з підготовки себе до майбутньої роботі. На руки обов’язково надягають стерильні рукавички, довгі волосся повинні бути прибрані, підв’язані. Робоче місце повинно розташовуватися в стерильному, добре провітрюваному приміщенні. Перед проведенням маніпуляції обов’язково перевіряється працездатність мікроскопа.

Наступним кроком буде підготовка предметних стекол. Якщо вони недостатньо чисті, то скла промивають під проточною водою з милом. Це допоможе видалити бруд, жир. Обов’язково поверхня обробляється спиртом або іншим способом, що використовуються в лабораторії.

Підготовка зразка

Методика забарвлення за Грамом передбачає підготовку зразка. Для цього беруть предметне скло і на його центр акуратно поміщають зразок. Методика фарбування мазків за Грамом дає можливість побачити тип бактерій, культивованих в чашці Петрі.

Дивіться також:  Яка біологічна роль ДНК? Будова і функції

Для початку роботи на скло наносять тонкий шар досліджуваної рідини. Не варто чекати більше доби від початку забору матеріалу до проведення аналізу, так як у багатьох патогенів руйнується клітинна стінка, і реакція на фарбування стає абсолютно непередбачуваною. Якщо ж передбачається почати дослідження тканин, то на предметне скло слід нанести кілька крапель матеріалу. Рідина розподіляється по склу рівним шаром ребром іншого скла. Зразком дають підсохнути.

Якщо для фарбування беруть зразок з чашки Петрі, то процедуру забору матеріалу проводять петлею. А при дослідженні мазка його притискають до предметного скла іншим склом.

Фіксація зразка

Методика забарвлення препарату за Грамом передбачає фіксацію зразка. Під дією тепла бактерії пристають до скла і не змиваються.

Для того щоб закріпити мазок, необхідно провести над пальником предметне скло. Не можна перегрівати скло, щоб у зразку не з’явилося змін.

Можна зафіксувати зразок метанолом. Для цього скло необхідно нанести кілька крапель метилового спирту, а надлишки злити. Скло просушується природним способом. Цей метод переважно з-за того, що він менше пошкоджує досліджувані клітини і показує більш чистий фон.

Фарбування

Методика приготування мазка препаратів забарвлення за Грамом передбачає фарбування в ємності, в яку буде поміщений зразок. Зазвичай для цього використовується лоток або скляне блюдце. В нього поміщають предметне скло з препаратом так, щоб рідина стікала в лоток.

Спочатку на зразок наноситься розчин кристалічного фіолетового або генцианово-фіолетового. Його набирають у піпетку і кілька крапель наносять на препарат. Через хвилину проводять оцінку результату. Всі грампозитивні патогени забарвляться в фіолетовий колір.

Потім барвник змивають водою так, щоб вона злегка обмила мазок. Далі на зразок наноситься йод і залишається на хвилину. Після цього так само акуратно змивають. Після цієї процедури на скло наноситься обесцвечивающее речовина. Це може бути розчин ацетону і спирту. Розчином обробляють мазок до тих пір, поки не зникне фіолетовий відтінок.

Дивіться також:  Імпост - це... Поняття, опис з фото, призначення і застосування в склопакетах

На мазок наноситься контрастний барвник. Це може бути фуксин або сафран. Він дозволяє створити контраст між грамнегативними та грампозитивними бактеріями. У результаті впливу препарату грамнегативні патогени забарвлюються в фуксиевый колір. Барвник змивають водою.

Завершальним етапом є просушування предметного скла. Після цього методика забарвлення за Грамом (в мікробіології вона використовується досить часто) вважається завершеною.

Оцінка результатів

Предметне скло поміщають під мікроскоп. Грампозитивні бактерії в мазку будуть пофарбовані у фіолетовий колір. Грамнегативні бактерії забарвляться в рожевий або червоний відтінок. Таке розмаїття виникає в результаті особливості будови стінок патогенів. В одні проникає тільки барвник фіолетовий, а в інші – фуксиевый.

До помилкового результату може призвести тривале знаходження предметного скла під дією знебарвлювати рідини. Тому процедуру проводять двічі, щоб переконатися в правильності діагнозу. Повторний аналіз дозволяє упевнитися, що забарвлення проведена правильно.

Під час роботи з патогенними мікроорганізмами завжди дотримуйтеся обережності, так як від цього залежить ваше здоров’я.