Фіксація зразка
Методика забарвлення препарату за Грамом передбачає фіксацію зразка. Під дією тепла бактерії пристають до скла і не змиваються.
Для того щоб закріпити мазок, необхідно провести над пальником предметне скло. Не можна перегрівати скло, щоб у зразку не з’явилося змін.
Можна зафіксувати зразок метанолом. Для цього скло необхідно нанести кілька крапель метилового спирту, а надлишки злити. Скло просушується природним способом. Цей метод переважно з-за того, що він менше пошкоджує досліджувані клітини і показує більш чистий фон.
Фарбування
Методика приготування мазка препаратів забарвлення за Грамом передбачає фарбування в ємності, в яку буде поміщений зразок. Зазвичай для цього використовується лоток або скляне блюдце. В нього поміщають предметне скло з препаратом так, щоб рідина стікала в лоток.
Спочатку на зразок наноситься розчин кристалічного фіолетового або генцианово-фіолетового. Його набирають у піпетку і кілька крапель наносять на препарат. Через хвилину проводять оцінку результату. Всі грампозитивні патогени забарвляться в фіолетовий колір.
Потім барвник змивають водою так, щоб вона злегка обмила мазок. Далі на зразок наноситься йод і залишається на хвилину. Після цього так само акуратно змивають. Після цієї процедури на скло наноситься обесцвечивающее речовина. Це може бути розчин ацетону і спирту. Розчином обробляють мазок до тих пір, поки не зникне фіолетовий відтінок.
На мазок наноситься контрастний барвник. Це може бути фуксин або сафран. Він дозволяє створити контраст між грамнегативними та грампозитивними бактеріями. У результаті впливу препарату грамнегативні патогени забарвлюються в фуксиевый колір. Барвник змивають водою.
Завершальним етапом є просушування предметного скла. Після цього методика забарвлення за Грамом (в мікробіології вона використовується досить часто) вважається завершеною.
